Anti

Scientific Reports volumen 12, número de artículo: 11514 (2022) Citar este artículo

2310 Accesos

2 citas

1 altmétrica

Detalles de métricas

El objetivo principal de nuestro estudio es evaluar la actividad anticancerígena de la cimetidina y la vitamina C mediante la lucha contra el papel de apoyo tumoral de los mediadores de los mastocitos (histamina, VEGF y TNF-α) dentro del microambiente tumoral y su efecto sobre la proteína quinasa. A (PKA)/sustrato del receptor de insulina-1 (IRS-1)/fosfatidilinositol-3-quinasa (PI3K)/serina/treonina quinasa-1 (AKT)/diana de mamíferos de la rapamicina (mTOR) en el cáncer de mama inducido por Ehrlich en ratones . Se llevó a cabo un estudio in vitro para evaluar la actividad antiproliferativa y el índice de combinación (IC) de los fármacos combinados. Además, el modelo de Ehrlich se indujo en ratones mediante inyección subcutánea de células de carcinoma de ascitis de Ehrlich (EAC) en la almohadilla de grasa mamaria, y luego se los dejó durante 9 días para que desarrollaran un tumor de mama sólido evidente. La terapia combinada poseyó el mejor efecto antiproliferativo, y un IC < 1 en la línea celular MCF7 indica un tipo sinérgico de interacción farmacológica. Con respecto al estudio in vivo, la combinación disminuyó la elevación del volumen del tumor y el nivel del antígeno carcinoembrionario (CEA) del marcador tumoral sérico. Se mitigaron el nivel sérico del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la tinción inmunohistoquímica para CD34 como marcadores de angiogénesis. Además, revirtió el estado de estrés oxidativo e inflamación. Mientras tanto, provocó un aumento de la apoptosis, lo que impide la supervivencia del tumor. Además, abordó los niveles elevados de histamina y monofosfato de adenosina cíclico (AMPc), impidiendo la activación de la señal (PKA/IRS-1/PI3K/AKT/mTOR). Finalmente, concluimos que la combinación sinérgica proporcionó un efecto antineoplásico prometedor al reducir la angiogénesis, el estrés oxidativo, aumentar la apoptosis, así como inhibir la activación de la señal PI3K/AKT/mTOR, y sugerir su uso como una opción de tratamiento para la mama. cáncer.

El cáncer de mama es uno de los tipos de neoplasia más comunes que causa mortalidad y morbilidad entre las mujeres en todo el mundo1. A pesar de la presencia de tratamientos convencionales eficaces contra el cáncer, como la quimioterapia, la radiación y/o la cirugía, los pacientes suelen enfrentar muchos efectos secundarios de estos tratamientos. Existe una necesidad urgente de encontrar nuevas opciones de tratamiento para el cáncer de mama para mejorar la calidad de vida de esas pacientes.

El cáncer de mama inducido por Ehrlich es un adenocarcinoma mamario indiferenciado agresivo que se desarrolla en ratones. Es un modelo simple que posee una duración corta para la inducción y se asemeja a la patogénesis del cáncer de mama en humanos, por lo que se suele utilizar para investigar nuevos fármacos prometedores en cáncer2.

El microambiente tumoral (TME) ha sido ampliamente estudiado por el papel de sus células residentes, como fibroblastos, células endoteliales, células madre cancerosas y células inmunes, en el mantenimiento, la recurrencia, la invasividad y la resistencia al tratamiento de las células cancerosas3. Paul Ehrlich fue el primero en reportar la presencia de mastocitos, también llamados mastocitos asociados a tumores (TAMC), en diferentes tipos de tumores sólidos humanos, especialmente en el cáncer de mama4. El papel de los TAMC en la TME sigue siendo controvertido. Por un lado, algunos investigadores informaron que la infiltración de mastocitos predice un mejor pronóstico en algunos tipos de cáncer5. Por otro lado, los TAMC desempeñan un papel importante en la progresión tumoral mediante la producción de factores proangiogénicos como la histamina, el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) y el factor de crecimiento de fibroblastos ( FGF)4. El CD34 se considera un marcador específico de la angiogénesis tumoral, ya que puede identificar el estado de formación de nuevos vasos sanguíneos durante el crecimiento del tumor6.

La histamina se produce principalmente a partir de basófilos y TAMC en el TME. El nivel elevado de histamina y los niveles de expresión de los receptores de histamina (H1R-H4R) en el TME juegan un papel importante en la progresión tumoral. Además, la histamina puede interactuar con los HR para reclutar cada vez más TAMC, lo que genera un círculo vicioso7.

Además, hay muchas células inmunes en el TME que pueden producir citocinas proinflamatorias como el TNF-α y especies reactivas de oxígeno (ROS) que posteriormente conducen a un estado de inflamación y estrés oxidativo. El estrés oxidativo se caracteriza por inclinar el equilibrio hacia los sistemas oxidantes (ROS y malondialdehído (MDA)) más que hacia los sistemas antioxidantes (superóxido dismutasa (SOD) y glutatión reducido (GSH)). Estos factores actúan juntos para alterar las proteínas responsables de la reparación del ADN y la apoptosis, favoreciendo la supervivencia, proliferación, migración y metástasis del tumor4,8.

Además, la activación de la señal PI3K/AKT/mTOR desempeña un papel en la angiogénesis, la resistencia a la apoptosis y la supervivencia de las células tumorales de mama. Esta vía se puede activar directamente a través de niveles elevados de ROS y VEGF en el TME9. Además, la histamina liberada por el TAMC puede activar indirectamente la vía PI3K/AKT/mTOR. Esto se puede explicar de la siguiente manera: la histamina del TAMC actúa sobre el H2R y se produce un aumento en el nivel de monofosfato de adenosina cíclico (AMPc) seguido de proteína quinasa A (PKA)10. Además, la PKA puede modular la fosforilación del sustrato del receptor de insulina 1 (IRS1), para activar la vía PI3K/AKT/mTOR11.

La apoptosis es una muerte celular programada que está involucrada en varias condiciones fisiológicas y patológicas. Durante la carcinogénesis, la evasión de la apoptosis se produce a través de un desequilibrio entre las proteínas proapoptóticas y antiapoptóticas, así como por un deterioro de la enzima caspasa-3. Esto conduce a una supervivencia prolongada de las células tumorales12.

La cimetidina (CIM) es un antagonista del H2R y se utiliza principalmente en el tratamiento de úlceras gastrointestinales debido a su capacidad para reducir la secreción de ácido gástrico. Posee actividad antitumoral contra varios tipos de cánceres, incluidos colon, gástrico, riñón y melanomas, al impedir que la histamina se una al H2R, inhibir el crecimiento tumoral y antagonizar la acción de las selectinas, lo que reduce la metástasis del cáncer13,14.

La vitamina C, también conocida como ácido ascórbico, es una vitamina soluble en agua esencial para la biosíntesis de colágeno, catecolaminas y carnitina. Además, actúa como cofactor de varias enzimas y antioxidante para proteger las células del daño causado por el estrés oxidativo15. Además, se ha demostrado que la vitamina C puede utilizarse para el tratamiento del cáncer y otras afecciones patológicas15,16. Su actividad antineoplásica está mediada por la inhibición del crecimiento tumoral y por la inducción de la apoptosis. Además, numerosos estudios han encontrado que la vitamina C está inversamente correlacionada con la histamina. Puede actuar como estabilizador de los mastocitos, prevenir la formación de histamina mediante la inhibición de la histidina descarboxilasa y aumentar la descomposición de la histamina mediante la activación de la diaminooxidasa15.

El principal objetivo de este estudio es evaluar la actividad antitumoral de la cimetidina y la vitamina C mitigando los mediadores de mastocitos asociados a tumores en el TME e inhibiendo la activación de la trayectoria PI3K/AKT/mTOR.

Las células de adenocarcinoma de mama humano MCF-7 (86.012.803) se adquirieron en (Sigma Aldrich, EE. UU.). Las células se cultivaron en EMEM (EBSS) (Gibco) + glutamina 2 mM (Gibco) + 1% de aminoácidos no esenciales (NEAA)(Gibco) + 10% de suero bovino fetal (FBS)/FCS (Gibco) en 75 cm2. matraz de cultivo. Las células se incubaron a 37 °C y 5% de CO2 en una atmósfera de aire hasta que se probaron las células.

Cada pocillo se sembró con (1 x 104) células en placas de cultivo de noventa y seis pocillos y se incubó durante 24 h a 37 °C. Luego, las células se trataron con diluciones seriadas al doble de varias concentraciones de cada uno de los siguientes fármacos: cimetidina, vitamina C y una combinación de cimetidina/vitamina C. Se utilizaron tres pocillos para cada concentración de los fármacos probados y la incubación Se continuó durante 48 h. Luego, se agregaron 20 μL de MTT 5 mg/mL (Invitrogen) a cada pocillo y se incubaron durante 4 h. A 37 °C en la campana de cultivo, el MTT se reemplazó por 150 μL de DMSO. La placa se cubrió con papel de aluminio y se agitó en un agitador orbital durante 15 min. La densidad óptica se midió a 490 nm utilizando un lector de microplacas (Biotek ELX-800, EE. UU.). Se utilizó la siguiente ecuación: % de viabilidad celular = At ​​Ac × 100, donde (At) es la absorbancia del fármaco y (Ac) es la absorbancia del control17.

Se utilizó el software CompuSyn (versión 1.0.1) para evaluar el índice de combinación (IC) de cimetidina con vitamina C in vitro, que revela el tipo de interacciones farmacológicas. Los valores de CI < 1 reflejan interacciones sinérgicas, mientras que CI = 1 indica efectos aditivos. El antagonismo farmacológico se indica con valores de IC > 118.

Se compraron ratones albinos suizos hembra (de 6 a 7 semanas, de 20 a 25 g de peso) de la Universidad de Pharos en Alejandría y se mantuvieron en observación durante una semana antes del estudio, con libre acceso a comida y agua. Todos los procedimientos experimentales se realizaron en estricta conformidad con la guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio (NIH), las pautas de investigación con animales: informes de experimentos in vivo (ARRIVE) y fueron aprobados por la "Unidad de investigación del comité de aprobación de ética, Pharos". Universidad de Alejandría" (PUA-0120219263029). Los desechos animales y biológicos se eliminaron de forma segura al final del estudio.

Se adquirieron ratones con carcinoma de ascitis de Ehrlich (EAC) del Instituto Nacional del Cáncer de Egipto (NCI; Universidad de El Cairo, Egipto). Se extrajo solución de ascitis de la cavidad peritoneal de ratones y se evaluó el recuento de células tumorales en el líquido de ascitis mediante un hemocitómetro de Neubauer. Además, la viabilidad celular se determinó según el método descrito anteriormente19. Luego, se suspendieron células de carcinoma de ascitis de Ehrlich (EAC) en solución salina tampón fosfato (PBS). Cada ratón del grupo experimental recibió 0,2 ml de solución salina EAC (2,5 × 106 células) por vía subcutánea en la almohadilla de grasa mamaria el día 0. Los ratones se dejaron durante 9 días con libre acceso a agua y alimentos para desarrollar cáncer de mama sólido20.

Cada 10 ratones se asignaron a un grupo formando 5 grupos: Grupo (1): ratones sanos involucrados (el grupo de control negativo); Grupo (2): involucró ratones con cáncer de mama sólido inducido por Ehrlich no tratados y tratados con ambos disolventes de los fármacos utilizados (el grupo de control positivo). Grupo (3): ratones involucrados tratados con cimetidina disuelta en carboximetilcelulosa sódica al 0,5% e inyectados peritumoralmente a una dosis de (200 mg/kg/día)4; Grupo (4): ratones tratados con vitamina C, disuelta en agua e inyectada peritumoralmente a una dosis de 4 g/kg/día8; Grupo (5): ratones involucrados tratados tanto con cimetidina como con vitamina C en las dosis antes mencionadas. Los medicamentos probados se administraron diariamente durante 15 días, desde el décimo día hasta el final del estudio.

Evaluamos el volumen del tumor (V) cada dos días hasta el último registro el día 25 después de la implantación, justo antes de escarificar a los ratones supervivientes. Usando un pie de rey, el volumen del tumor se calculó usando la siguiente fórmula: V = (largo + [ancho]2)/221.

Al final del estudio se realizó la recolección de muestras de suero y tejido de cáncer de mama. El día 25, los ratones fueron anestesiados con ketamina y xileno. Luego, se recogieron muestras de sangre del seno orbitario en tubos de vidrio no heparinizados y se dejaron durante 30 minutos a temperatura ambiente para que coagularan. Luego las muestras se centrifugaron a 5000 rpm durante 10 min para obtener el suero que se almacenó a -80 °C. Todos los ratones se sacrificaron mediante dislocación cervical y el tumor se extirpó de cada ratón, se lavó inmediatamente con solución salina helada y se secó sobre papel de filtro. Finalmente, la muestra del tumor se dividió en dos partes. La primera parte se conservó en una solución de formaldehído al 10% durante la noche y se procesó para la formación de bloques incluidos en parafina que se utilizarán en evaluaciones histopatológicas e inmunohistoquímicas. La segunda parte se conservó a -80 °C para la determinación de diferentes parámetros a nivel biológico y molecular.

Los niveles séricos de CEA (n.º de catálogo E4741, Biovision, Northern California) y VEGF (n.º de catálogo BMS619-2, Thermofisher Scientific, EE. UU.) se determinaron utilizando kits de ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) de acuerdo con el Instrucciones del fabricante.

Los tejidos normales de la glándula mamaria y los tejidos tumorales se homogeneizaron con KCl al 1,15% enfriado con hielo y tampón de fosfato de sodio-potasio a 0,01 mol/l (pH 7,4), seguido de centrifugación a 4 °C durante 20 minutos a 10.000 xg.

El sobrenadante obtenido del proceso de homogeneización se utilizó para determinar los niveles en tejido tumoral de los siguientes parámetros de estrés oxidativo, GSH (n.º de catálogo MBS026635, My BioSource, EE. UU.), MDA (n.º de catálogo MBS741034, My BioSource, EE. UU.) y SOD. (n.º de catálogo MBS034842, My BioSource, EE. UU.) mediante el uso de kits de ensayo colorimétricos según las instrucciones del fabricante.

Los niveles de TNF-α en los tejidos normales de la glándula mamaria, así como en los tejidos tumorales, se estimaron mediante un kit ELISA de acuerdo con las instrucciones del fabricante (n.º de catálogo MBS825075, My BioSource, EE. UU.).

De acuerdo con las instrucciones del fabricante, la concentración de histamina en la glándula mamaria y los microambientes del tumor se determinó utilizando un kit ELISA colorimétrico competitivo (n.º de catálogo MBS005252, My BioSource, EE. UU.).

El nivel de AMPc intracelular se midió mediante un kit ELISA colorimétrico competitivo (n.º de catálogo ab65355, Abcam, EE. UU.) de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

El ARN total se extrajo del cáncer de mama y se homogeneizó tejido mamario normal utilizando RNAiso Plus (Takara Bio, Inc.), según el protocolo del fabricante. Luego, las muestras de ARN se transcribieron inversamente al ADNc a 37 °C durante 15 min y posteriormente se amplificaron de la siguiente manera (35 ciclos: 30 s a 94 °C, 30 s a 55 °C y 60 s a 72 °C), utilizando el sistema Superscript One-Step RT-PCR (n.º de catálogo 12594100, Invitrogen, EE. UU.) con cebadores de oligonucleótidos específicos de genes (Tabla 1). El software Stratagene MX3005P determinó las curvas de amplificación y los valores de Ct. Las eficiencias de los cebadores para todos los pares de cebadores utilizados fueron del 98%. Para estimar la variación de la expresión génica sobre el ARN de las diferentes muestras, se comparó el Ct de cada muestra con el del grupo control positivo. El nivel de expresión relativo del ARNm de IRS-1 se calculó utilizando el método "2-ΔΔCt".

Las muestras de tejido fijadas e incluidas en parafina se desparafinaron, se hidrataron en xileno, soluciones de alcohol descendentes y se enjuagaron con PBS. Las proteínas se extrajeron utilizando el kit de tejido Qproteome FFPE (n.º de catálogo 37623, Qiagen, Italia) mediante incubación en un tampón de extracción a 100 °C durante 20 minutos, luego se incubaron durante 2 h a 80 °C según el manual del fabricante. Luego, la muestra se enfrió a 4 °C durante 5 min y se centrifugó (14.000 xg, 15 min, 4 °C). El sobrenadante se transfirió a un nuevo tubo de recolección. Posteriormente, los lisados ​​extraídos se resolvieron en gel de poliacrilamida SDS-PAGE al 10% en un sistema de tetracélulas BioRad Mini Protean a 150 V durante 1 h. (kit de ensayo de proteínas Bio-Rad) según las instrucciones del fabricante. Las proteínas sometidas a electroforesis se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa y luego las membranas se bloquearon a temperatura ambiente en TBST (Tris 100 mM, pH 7,5, NaCl al 0,9 %, Tween 20 al 0,1 %) más leche en polvo desnatada al 5 % durante 1 h y se incubaron durante la noche. a 4 °C con los anticuerpos primarios. Los anticuerpos primarios fueron los siguientes: anticuerpo PKA-C α/β (n.º de catálogo MAB5908, sistemas R y D, Minneapolis, MN, EE. UU.), PI3K (n.º de catálogo ab191606; Abcam), Phospho-PI3K p85 alfa (Tyr607 ) Anticuerpo policlonal (n.º de cat. PA5-38905, Thermofisher Scientific, EE. UU.), AKT (n.º de cat. 4685; Cell Signaling Technology, Inc.), anticuerpo monoclonal fosfo-AKT1 (Ser473) (n.º de cat. 44-621G, Thermofisher Scientific , EE. UU.), mTOR (n.° de cat. 2983; Cell Signaling Technology, Inc.) y anticuerpo policlonal Phospho-mTOR (Ser2454) (n.° de cat. PA5-105571, Thermofisher Scientific, EE. UU.). Luego, las secciones se lavaron tres veces con TBST y se incubaron con anticuerpo secundario de cabra anti-conejo-HRP (n.º de catálogo 31460, Thermofisher Scientific, EE. UU.) a una dilución de 1:20 000 y, finalmente, las proteínas inmunomarcadas se detectaron mediante incubación con El sustrato ECL y las señales quimioluminiscentes se capturaron utilizando un generador de imágenes basado en una cámara CCD. Se utilizó un software de análisis de imágenes para leer la intensidad de la banda de las proteínas objetivo frente a la muestra de control después de la normalización con beta-actina en el generador de imágenes Chemi Doc MP22.

Se seccionaron cortes de cinco μm de bloques tumorales y se tiñeron con hematoxilina-eosina (H&E) para examen histopatológico, recuentos mitóticos en 10 campos de alta potencia (HPF) y evaluación morfométrica del área de necrosis tumoral utilizando Leica Application Suite, versión 4.12. 0 (Leica Microsystems CMS GmbH) programa de análisis de imágenes.

Como se describió anteriormente, los bloques de parafina incluidos en tejido se seccionaron en portaobjetos cargados positivamente, se desparafinaron y se rehidrataron. Se utilizó tampón citrato (pH 6,0) para la recuperación de antígeno inducida por calor. La peroxidasa endógena se bloqueó con H2O2 y biotina endógena con la ayuda de un tampón de bloqueo (Cat no 32052, Thermofisher Scientific, EE. UU.). Las secciones se trataron con anticuerpos primarios contra Caspasa-3 (Cat no 9662, Cell Signaling Technology, MA, EE. UU.) con una dilución de (1:1000) y CD34 (Cat no 3569, Cell Signaling Technology, MA, EE. UU.) con una dilución de (1:1000). Las inmunorreacciones se desarrollaron utilizando el kit de tinción de IgG de ratón ABC Peroxidasa ultrasensible (n.º de catálogo 32052, Thermofisher Scientific, EE. UU.) utilizando el anticuerpo secundario biotinilado. Se utilizó DAB (n.º de catálogo 34065, Thermofisher Scientific, EE. UU.) como cromógeno y el tejido se tiñó con hematoxilina de Mayer.

Las secciones teñidas con caspasa-3 se evaluaron contando el número de células teñidas positivamente (citoplasmáticas) en 10 HPF en el frente invasivo del tumor, lejos de las áreas centrales de necrosis. Las secciones teñidas con CD34 se evaluaron contando el número de células endoteliales teñidas positivamente que recubren los espacios vasculares dentro del tumor en 10HPF. Todas las evaluaciones se realizaron utilizando el software de análisis de imágenes Leica Application Suite, versión 4.12.0 (Leica Microsystems CMS GmbH).

Todos los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software GraphPad Prism v. 5.03 (GraphPad Software, San Diego, CA, EE. UU.). Los datos se expresaron como media ± DE (n = 8). Las diferencias estadísticas entre los grupos se determinaron mediante ANOVA unidireccional, seguido de la prueba de comparación múltiple post hoc de Tukey. Se consideró significativo un valor de p inferior a 0,05. Se utilizó el software CompuSyn (versión 1.0.1) para estimar los efectos sinérgicos de diferentes combinaciones de fármacos generando el índice de combinación (CI), donde CI < 1, CI = 1 y CI > 1 designan sinergismo, efecto aditivo y antagonismo. , respectivamente. Utilizando la prueba del coeficiente de Spearman, se realizaron correlaciones estadísticas entre diferentes parámetros mediante el paquete de software IBM SPSS versión 20.0 (Armonk, NY: IBM Corp). Se consideró significativo un valor de p inferior a 0,05.

El protocolo y los procedimientos experimentales cumplieron con las regulaciones declaradas por las pautas ARRIVE (Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments). El protocolo fue aprobado por el "Comité de Aprobación de Ética de la Unidad de Investigación de la Universidad Pharos en Alejandría" (PUA01202109263029).

Los valores de CI50 de vitamina C y cimetidina después de agregarse al medio de cultivo de la línea celular MCF7 fueron (373,73 y 144,17 μmol/L, respectivamente) (Tabla 2, Fig. 1 y Suplemento 6). Por otro lado, la adición de una combinación de vitamina C/cimetidina al medio de cultivo de la línea celular MCF7 dio como resultado una reducción de 3,42 veces la CI50 (42,16 μmol/L) en comparación con el medio tratado con cimetidina.

Efectos de diluciones seriadas al doble de vitamina C, cimetidina y su combinación sobre el% de viabilidad celular de células MCF7 mediante el ensayo MTT.

El análisis de IC utilizando el software CompuSyn (versión 1.0.1) de diferentes concentraciones de cimetidina combinada con vitamina C en la línea celular humana MCF-7 mostró un efecto sinérgico (IC <1) (Tabla 3 y Fig. 2).

Gráfico del índice de combinación de vitamina C combinada con cimetidina con diluciones dobles en serie en una proporción constante (1:1) en la línea celular humana MCF7. Los valores del CI < 1 reflejan interacciones sinérgicas.

Los efectos del tratamiento farmacológico sobre el crecimiento del cáncer de mama se muestran en (Tabla 4, Fig. 3 y Suplemento 6). El crecimiento del cáncer de mama se evaluó midiendo el volumen del tumor con un calibre Vernier desde el día 9 hasta el final del estudio. Todos los ratones no tratados mostraron un tumor sólido observable en la almohadilla de grasa mamaria el día 9. En consecuencia, los fármacos probados se administraron el día 10. En los ratones no tratados, el volumen del tumor continuó aumentando progresivamente hasta el final del período de tratamiento. La cimetidina, la vitamina C y su combinación revirtieron significativamente la progresión del volumen del tumor en comparación con el grupo no tratado, en todos los días de seguimiento. El día 25, la cimetidina provocó una reducción más significativa en el volumen del tumor que la causada por la vitamina C, P <0,05. Sin embargo, la combinación de ambos fármacos provocó la mitigación más significativa en el volumen del tumor en comparación con la cimetidina o la vitamina C solas, P <0,05.

Los cambios en el volumen del tumor de Ehrlich indujeron cáncer de mama sólido en ratones después del tratamiento con cimetidina a dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días. Cada punto representa la media ± DE de 10 ratones. * es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

El CEA es un marcador tumoral, en el que los cambios en su nivel sérico en diferentes grupos se ilustran en (Fig. 4 y Suplemento 6). Nuestros resultados mostraron una provocación significativa en el nivel sérico de CEA en el grupo de cáncer de mama inducido por Ehrlich (12 ± 0,80 pg/ml) en comparación con ratones normales (0,4 ± 0,05 pg/ml), respectivamente. Los tratamientos con cimetidina/vitamina C en dosis de 200 mg/kg/día y 4 g/kg/día mitigaron el nivel sérico elevado de CEA (5,52 ± 0,48 pg/ml) y (7 ± 0,71 pg/ml), respectivamente. La terapia combinada provocó la prevención más significativa en el nivel sérico elevado del parámetro antes mencionado (4,6 ± 0,44 pg/mL).

Cambios en la concentración sérica de CEA después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich en ratones. Los datos se presentan como media ± DE.* Significativamente diferente del grupo de control normal, P < 0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

El efecto del tratamiento con cimetidina, vitamina C y su combinación sobre el VEGF sérico se presenta en (Fig. 5 y Suplemento 6). Hubo una elevación significativa de 3,02 veces en el nivel sérico de VEGF en ratones con cáncer de mama Ehrlich en comparación con ratones de control normales. La cimetidina y la vitamina C suprimieron significativamente los niveles elevados de VEGF en suero en un 53,64% y un 43,71%, respectivamente, en comparación con los ratones no tratados. La terapia combinada provocó la disminución más significativa en el nivel sérico de VEGF en un 64,3% en comparación con los ratones portadores de cáncer de mama inducido por Ehrlich no tratados. Esto puso de relieve los prometedores efectos antiangiogénicos de los fármacos utilizados, con especial énfasis en la terapia combinada.

Los cambios en la concentración sérica de VEGF después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich en ratones. Los datos se presentan como media ± DE. * es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

La variación en los niveles de tejido tumoral de los parámetros de estrés oxidativo (MDA, SOD, GSH) después de la administración de cimetidina, vitamina C y una combinación de ambos fármacos se muestra en (Fig. 6 y Suplemento 6). Los resultados de nuestro estudio mostraron que el nivel tumoral de MDA se elevó significativamente en 4,5 veces en comparación con lo normal. La cimetidina provocó una disminución del 50%, mientras que la vitamina C provocó una disminución del 34,44% en el nivel tumoral de MDA en comparación con los ratones no tratados. La combinación de los dos fármacos mencionados anteriormente provocó una disminución del 64,44% en el nivel tumoral de MDA en comparación con los ratones portadores de tumores no tratados.

Los cambios en los niveles tisulares de los parámetros de estrés oxidativo (MDA, GSH, SOD) tras el tratamiento con cimetidina a dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de Ehrlich de cáncer de mama en ratones. Los datos se presentan como media ± DE.* es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

Además, los niveles tumorales de GSH y SOD disminuyeron significativamente en un 81,53% y un 68,75%, respectivamente, en comparación con sus niveles en la grasa mamaria de ratones normales. El tratamiento con cimetidina, vitamina C y su combinación provocó una elevación significativa en el nivel tumoral de GSH de 2,86, 2,45 y 3,94 veces, respectivamente. Además, el nivel del tumor SOD aumentó 2,16 veces después del tratamiento con cimetidina, 1,56 veces después del tratamiento con vitamina C y 2,8 veces después de la terapia combinada en comparación con el grupo no tratado.

Se evaluó el cambio en el nivel de TNF-α en el tejido tumoral en diferentes grupos para obtener una idea del medio inflamatorio (Fig. 7 y Suplemento 6). Los resultados mostraron un aumento notable en el nivel de TNF-α proinflamatorio en el tejido tumoral en el grupo de Ehrlich, lo que representa un cambio del 1150% con respecto al grupo de control normal. Sin embargo, la cimetidina, la vitamina C y la combinación de ambos fármacos provocaron cambios del 73,33, 62 y 80% en el tumor sólido de mama inducido por Ehrlich. Esto ilustra que la terapia combinada tuvo el efecto más significativo en la reducción del tejido tumoral de TNF-α.

Los cambios en el nivel tisular de TNF-α después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich. en ratones. Los datos se presentan como media ± DE.* es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

La Figura 8 y el Suplemento 6 ilustran los niveles de histamina en el tejido del microambiente mamario y tumoral en diferentes grupos, ya sea sin tratar o tratados con vitamina C y/o cimetidina. Hubo un incremento significativo en el nivel de histamina en el tejido en ratones con tumores de mama no tratados, aproximadamente 4,5 veces en comparación con el grupo normal. Todos los tratamientos administrados pudieron reducir el nivel de histamina en el tejido, excepto la cimetidina, y no hubo diferencias significativas con respecto al grupo no tratado. Además, no hubo diferencias significativas entre el grupo tratado con vitamina C y el tratado combinado.

Los cambios en el nivel tisular de histamina después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich en ratones . Los datos se presentan como media ± DE.* es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ Significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P < 0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

El nivel de AMPc del tejido mamario y tumoral en ratones normales con mama inducida por Ehrlich y en diferentes grupos tratados se muestra en (Fig. 9 y Suplemento 6). Se observó que el nivel de AMPc en el tejido aumentó 10,5 veces en los ratones inducidos por Ehrlich en comparación con los ratones normales. Todos los tratamientos administrados mitigaron significativamente el nivel tisular de AMPc, observándose la reducción más significativa en el grupo tratado con terapia combinada, una disminución del 59,52 % en el grupo tratado con vitamina C, una disminución del 64,33 % en el grupo tratado con cimetidina y una disminución del 89,17 % en el grupo tratado con terapia combinada. grupo tratado.

Los cambios en el nivel tisular de AMPc después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich en ratones . Los datos se presentan como media ± DE.* es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

Para dilucidar los mecanismos por los cuales la histamina producida por TAMC podría modular la vía PI3K/AKT/mTOR, se evaluó la expresión del ARNm de IRS-1 (Fig. 10 y Suplemento 6). El ARNm relativo de IRS-1 en el grupo de Ehrlich se elevó significativamente en 12,5 veces, respectivamente, en comparación con el de los ratones de control normales. El tratamiento con vitamina C redujo significativamente la expresión relativa del ARNm del gen diana en un 38,3% en comparación con los ratones no tratados con tumores. Además, la cimetidina fue capaz de causar una mitigación significativa en la expresión relativa del ARNm de IRS-1 en un 53,5% en comparación con los ratones del grupo de Ehrlich. Finalmente, la combinación de ambos fármacos provocó la disminución más significativa del gen mencionado anteriormente, un 73,1%.

El nivel relativo de expresión de ARNm de IRS-1 después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich en ratones. Los datos se presentan como media ± DE.* es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

(Fig. 11A, B y Suplementario 1,2,3,4,5,7,8,9) ilustran la modificación en el nivel de expresión de proteínas de PKA-C α/β, PI3K total y fosforilada, AKT y mTOR. en diferentes grupos, lo cual se llevó a cabo mediante la técnica de western blot. En primer lugar, el tumor sólido inducido por Ehrlich en la glándula mamaria en ratones no tratados mostró una elevación significativa en los niveles relativos de expresión de proteínas de PKA-C α/β, P-PI3K/T-PI3K, P-AKT/T-AKT, P- mTOR/T-mTOR, que juegan un papel importante en la patogénesis de la enfermedad. Además, todos los tratamientos administrados en este estudio mitigaron notablemente la expresión relativa de todas las proteínas antes mencionadas. El efecto de la cimetidina fue más obvio que el de la vitamina C para todos los parámetros mencionados anteriormente excepto para PKA-C α/β. No hubo diferencias significativas entre los grupos tratados con vitamina C y cimetidina. Especial énfasis en el efecto de la terapia combinada, que provocó la reducción más significativa en la expresión de las proteínas mencionadas anteriormente, modulando esta vía y mitigando su papel en la patogénesis de la enfermedad.

Los cambios en los niveles de expresión de PKA-C α/β, PI3K total y fosforilada, AKT, mTOR después del tratamiento con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días después de la inducción de cáncer de mama por parte de Ehrlich en ratones. Los datos se presentan como media ± DE.* es significativamente diferente del grupo de control normal, P <0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05.

Se utilizó tinción con hematoxilina y eosina (H y E) para evaluar los cambios histopatológicos en los tejidos mamarios normales en comparación con el tumor sólido de mama inducido por Ehrlich y el efecto de diferentes tratamientos farmacológicos (Fig. 12). El examen normal de la grasa mamaria reveló lóbulos y conductos mamarios normales (Fig. 12A). Por otro lado, una evaluación del grupo inducido mostró tumores infiltrativos agresivos compuestos de láminas, masas y cordones de células cohesivas poligonales con núcleos vesiculares irregulares agrandados con nucléolos prominentes y amplio citoplasma eosinofílico a anfófilo (Fig. 12B).

Evaluación histopatológica e histomorfométrica utilizando H y E para la almohadilla grasa mamaria normal y el tumor sólido de mama inducido por Ehrlich en ratones no tratados y en diferentes grupos tratados con cimetidina a una dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a una dosis de 4 g/kg/día. día, y su combinación durante 15 días. Los datos se presentan como media ± DE.* Significativamente diferente del grupo de control normal, P < 0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05. (A) La mama de un ratón de control normal muestra lóbulos y conductos mamarios normales. (B) El tumor de Ehrlich invade todo el tejido mamario. (C) El tumor de Ehrlich no tratado muestra numerosas figuras mitóticas. (D) Se muestra una reducción leve de las figuras mitóticas en el tumor sólido de mama después del tratamiento con vitamina C. (E) Se muestra una reducción moderada de las figuras mitóticas en el tumor sólido de mama después del tratamiento con cimetidina. (F) La reducción más destacada se muestra en el tumor sólido de mama después del tratamiento con la combinación de cimetidina y vitamina C. (G) El tumor de Ehrlich está compuesto por láminas y masas de grandes células epitelioides poligonales, con áreas centrales de necrosis. (H) Demuestra una elevación leve en el grado de necrosis dentro de los tumores después del tratamiento con vitamina C. (I) Revela una elevación moderada en el grado de necrosis dentro de los tumores después del tratamiento con cimetidina. (J) Indica la elevación más prominente en la extensión de la necrosis dentro de los tumores después del tratamiento con la terapia combinada.

En los tejidos de cáncer de mama inducido por Ehrlich de ratones no tratados, las figuras mitóticas eran numerosas y alcanzaban recuentos medios de (55/10 HPF) (Fig. 12C). El tratamiento con vitamina C redujo significativamente la tasa mitótica alcanzando recuentos medios de (32/10 HPF), valor de P <0,05, Fig. 12D. Además, los ratones tratados con cimetidina mostraron una reducción más significativa en la tasa mitótica, alcanzando recuentos medios de (24/10 HPF), valor de P <0,05, Fig. 12E. Además, el tratamiento combinado provocó la reducción significativa más observada en las figuras mitóticas alcanzando recuentos medios de (9/10 HPF), valor de P <0,05 (Fig. 12F).

Se observaron pequeñas áreas de necrosis dentro del centro de los tumores en los ratones portadores de cáncer de mama sólido (área media del 10% de la masa tumoral) (Fig. 12G).

El tratamiento con vitamina C provocó una elevación leve en las áreas necróticas (área media del 34% del volumen del tumor) (Fig. 12H). Al mismo tiempo, la cimetidina mostró un incremento moderado en las áreas necróticas (área media del 54% del volumen tumoral) (Fig. 12I). En los ratones tratados con terapia combinada, los tumores mostraron las áreas más grandes de necrosis (área media del 75 % del volumen del tumor), valor de P <0,05 (Fig. 12J). Todas las áreas aumentadas de necrosis se observaron principalmente en los límites de los tejidos tumorales.

La tinción inmunohistoquímica para Caspasa 3 y CD34 se muestra en (Fig. 13). Esta inmunotinción reveló el grado de apoptosis y angiogénesis en el tumor sólido de mama después del tratamiento con vitamina C y/o cimetidina. El recuento medio de caspasa 3 en el cáncer de mama no tratado en ratones fue 10/10HPF (Fig. 13A). El tratamiento con vitamina C aumentó levemente el nivel de caspasa 3 en el tumor de mama, alcanzando un recuento medio de 54/10 HPF (Fig. 13B). El tratamiento con cimetidina aumentó moderadamente el nivel de caspasa 3 en el tumor de mama, alcanzando un recuento medio de 60/10 HPF (Fig. 13C). La terapia combinada provocó el aumento más prominente en el nivel de caspasa 3 en el tumor de mama, alcanzando un recuento medio de 87/10 HPF (Fig. 13D).

Los cambios en la inmunotinción de caspasa 3 y CD34 en Ehrlich indujeron tumor sólido de mama en ratones no tratados y en diferentes grupos tratados con cimetidina a dosis de 200 mg/kg/día, vitamina C a dosis de 4 g/kg/día y su combinación durante 15 días. Los datos se presentan como media ± DE.* Significativamente diferente del grupo de control normal, P < 0,05. @ es significativamente diferente del grupo no tratado con Ehrlich, P <0,05. $ es significativamente diferente del grupo tratado con vitamina C, P <0,05. # es significativamente diferente del grupo tratado con cimetidina, P <0,05. (A) muestra la inmunotinción de caspasa 3 dentro del tumor de ratones no tratados. (B – D) Muestra la inmunotinción de caspasa 3 dentro del tumor después del tratamiento con vitamina C, cimetidina y la terapia combinada, respectivamente. (E) muestra la inmunotinción de CD34 dentro del tumor de ratones no tratados. (F – H) revela la inmunotinción de CD34 dentro de los tumores después del tratamiento con vitamina C, cimetidina y la terapia combinada, respectivamente.

La tinción para CD34 destacó los vasos tumorales ampliamente formados, particularmente en el frente del tumor invasivo (recuento medio de 39/10HPF) (Fig. 13E). El tratamiento con vitamina C provocó una leve disminución del CD34, alcanzando un recuento medio de (25/10HPF) (Fig. 13F). El tratamiento con cimetidina provocó una reducción moderada de la angiogénesis que la vitamina C, alcanzando un recuento medio de 15/10HPF (Fig. 13G). La terapia combinada provocó la reducción más significativa en el CD34, alcanzando un recuento medio de 9/10HPF (Fig. 13H).

Las correlaciones estadísticas se realizaron utilizando la prueba del coeficiente de Spearman para investigar la asociación entre los mediadores de los mastocitos (histamina, VEGF y TNF-α) y los miembros de la vía PI3K/AKT/mTOR, la apoptosis y la angiogénesis dentro del grupo tratado con cimetidina y vitamina C. Los resultados de las correlaciones estadísticas revelaron una correlación positiva entre los mediadores de los mastocitos (histamina, VEGF y TNF-α) y cada uno de PI3K, AKT, mTOR, PKA, IRS1 y CD 34. Por otro lado, se encontró una correlación negativa. observado entre los mediadores de mastocitos (histamina, VEGF y TNF-α) y los niveles de caspasa-3 dentro del TME (Tabla 5). Los mecanismos propuestos de las correlaciones y el mecanismo de acción propuesto de cimetidina y vitamina C se resumen en (Fig. 14).

Muestra el papel de los mastocitos asociados a tumores y sus mediadores (histamina, VEGF y TNF-α) dentro del TME, así como el mecanismo propuesto del efecto antitumoral de la cimetidina/vitamina C mediante la modulación de los mediadores de los mastocitos, lo que resulta en la restauración del equilibrio del estrés oxidativo, inhibición de la angiogénesis e inactivación de la vía PI3K/AKT/mTOR que conduce a la apoptosis de las células cancerosas. Mastocitos asociados a tumores TAMC, microambiente tumoral TME, especies reactivas de oxígeno ROS, receptor 2 de histamina H2R, factor de crecimiento endotelial vascular VEGF, factor de necrosis tumoral alfa TNF-α, monofosfato de adenosina cíclico AMPc, proteína quinasa A PKA, sustrato del receptor de insulina IRS-1 -1, fosfatidilinositol-3-quinasa PI3K, serina/treonina quinasa-1 AKT, objetivo de la rapamicina en mamíferos m-TOR.

El cáncer de mama es la neoplasia maligna más frecuente en las mujeres y una causa común de muerte en todo el mundo. Si bien las primeras etapas del cáncer de mama se asocian con un buen pronóstico, la tasa de supervivencia disminuye rápidamente una vez que el tumor hace metástasis y se disemina a órganos distantes. Las opciones de tratamiento convencionales para el cáncer de mama son efectivas pero conllevan muchos efectos secundarios que los pacientes no pueden soportar en muchos casos. Los enfoques recientes en investigación tienen como objetivo encontrar posibles sustituciones farmacológicas a los tratamientos convencionales del cáncer de mama para mejorar la calidad de vida de estos pacientes1.

El TME es un objetivo prometedor para la terapia contra el cáncer porque sus células residentes desempeñan un papel fundamental en la definición de la respuesta inmune del tumor, ya sea promoviendo el crecimiento y la proliferación del tumor o mejorando el efecto antitumoral de las células efectoras inmunes. Los mastocitos y sus mediadores se han relacionado previamente con la progresión tumoral y la metástasis, donde la histamina, el mediador primario de los mastocitos, y sus receptores (HR1-HR4) estaban regulados positivamente en muchos cánceres y se asociaban con la metástasis de supervivencia del cáncer y el reclutamiento de células supresoras en el TME4.

La cimetidina (CIM) es un H2RA que se utiliza para acelerar la curación de las úlceras gastrointestinales. En estudios previos se ha demostrado que posee actividad antitumoral frente a cánceres de colon, gástrico, riñón y melanomas13. El ácido ascórbico es una vitamina soluble en agua y un potente fármaco antioxidante utilizado para tratar muchas afecciones23. Muchos estudios previos ilustraron su eficacia para retrasar el crecimiento tumoral en humanos y modelos tumorales murinos y su capacidad para actuar como estabilizador de mastocitos24,25,26.

Los medicamentos utilizados en este estudio se eligieron en base a estos hallazgos previos. Nuestro objetivo principal fue determinar la actividad antitumoral de la cimetidina, la vitamina C y su combinación dirigiéndose a TAMC y sus mediadores (histamina, VEGF y TNF-α) en el TME e investigando su efecto sobre la señal de PI3K/AKT/mTOR en Ehrlich indujo cáncer de mama en ratones.

Se eligió el modelo de cáncer de mama sólido inducido por Ehrlich en ratones debido a su simplicidad, corta duración del método de inducción y cercanía a la patogénesis del cáncer de mama humano27.

En cuanto a los niveles de mediadores TAMC dentro del TME, los datos actuales revelaron un incremento en el nivel de histamina en el tumor de ratones no tratados en comparación con la almohadilla de grasa mamaria normal, lo que fue consistente con estudios previos28,29. La eficacia de la cimetidina para disminuir el nivel de histamina dentro del TME fue significativamente menor que la observada en los grupos de vitamina C y terapia combinada. La reducción más sustancial se observó en el grupo tratado con terapia combinada. Se ha informado anteriormente que la cimetidina (antagonista H2R) mitigó el efecto de la histamina en líneas celulares de cáncer de mama y melanoma30; sin embargo, otros receptores de histamina desempeñan un papel vital dentro del TME. El HR4 se sobreexpresó en TAMC y fue fundamental en el reclutamiento de mastocitos mediado por histamina en el TME. Por lo tanto, en este caso, la cimetidina no tiene la capacidad de prevenir el reclutamiento de mastocitos31. Por el contrario, la vitamina C funciona de manera diferente; actúa como estabilizador de los mastocitos e inhibe la histidina descarboxilasa, la enzima esencial para la producción de histamina. Finalmente, regula positivamente la degradación de la histamina al aumentar el nivel de diaminooxidasa15.

En este documento, podríamos sugerir que el aumento esperado en el recuento de mastocitos en los tumores de mama de ratones no tratados no solo fue responsable de la elevación del nivel de histamina sino también de un aumento en los niveles de VEGF y angiogénesis en tumores de mama no tratados en ratones. Ambos parámetros elevados estuvieron implicados en la patogénesis y progresión del cáncer de mama32.

La angiogénesis aumenta el crecimiento y la proliferación tumoral. Por lo tanto, los niveles séricos de VEGF y el recuento de CD34 se evaluaron como marcadores primarios de angiogénesis. Los resultados actuales mostraron un aumento considerable en los niveles séricos de VEGF y el recuento de CD34 en tejidos tumorales en ratones no tratados en comparación con los normales, lo que corrobora estudios previos20,33,34. Todos los tratamientos en nuestro estudio causaron una disminución importante en los niveles séricos elevados de VEGF y el recuento tisular de CD34 en el cáncer de mama inducido por Ehrlich en ratones. Además, resultados previos ilustraron que el aumento de la acumulación de mastocitos condujo a la liberación de histamina, lo que contribuyó a la angiogénesis en la sobreexpresión de la proteína VEGF inducida por carragenina y al tejido de granulación en ratas a través de la vía H2R/cAMP/PKA35,36.

Además, se demostró que la cimetidina inhibe la angiogénesis en el tejido de granulación en el modelo antes mencionado37. Además, se descubrió que la cimetidina disminuye significativamente los niveles de VEGF tanto en suero como en tejido en ratones portadores de Colon 3838. Se demostró la capacidad de la vitamina C para inclinar la producción de VEGF en células de melanoma murino B16F10 y el modelo de xenoinjerto de cáncer de colon39,40. En este caso, la terapia combinada de cimetidina y vitamina C provocó la disminución más significativa en los niveles séricos de VEGF y la expresión de CD34 en tejidos de cáncer de mama, lo que ilustra su prometedor efecto antiangiogénico en el tratamiento del cáncer de mama.

El TNF-α, el tercer mediador TAMC estudiado, no es sólo una citoquina proinflamatoria producida por las células inflamatorias en el TME, sino también un agente protumoral. Los hallazgos actuales revelan que el cáncer de mama inducido por Ehrlich provocó los niveles de TNF-α en el tumor, mientras que la cimetidina, la vitamina C y su combinación redujeron el nivel de citoquinas proinflamatorias antes mencionado. La reducción más significativa se observó en el grupo tratado con combinación, lo que enfatiza el papel de esta terapia en la mitigación de la inflamación y la prevención de la activación de otros mecanismos moleculares implicados en la progresión del cáncer de mama41. Se ha informado que la vitamina C combate el TNF-α en pacientes con neumonía grave adquirida en la comunidad y en células de macrófagos inducidas por LPS42. El tratamiento previo con cimetidina para la ingesta de alcohol en ratas redujo el nivel de TNF-α de la mucosa gástrica en comparación con las ratas tratadas con alcohol43. El papel del TNF-α dentro del TME es versátil y apoya el crecimiento tumoral en muchos mecanismos. Se descubrió que poseía propiedades proangiogénicas. Las correlaciones estadísticas revelaron una asociación positiva entre los tres mediadores TAMC y el marcador de angiogénesis CD34. Además, se observó que el TNF-α tiene la capacidad de aumentar el estrés oxidativo dentro del TME, lo que conduce a una mayor proliferación y reclutamiento de células inmunes inhibidoras dentro del TME, como las células T reguladoras (Treg) y las células supresoras derivadas de mieloides. MDSC) y la apoptosis de las células T efectoras, apoyando así la evasión inmune del tumor44.

Además, se demostró que el estado de estrés oxidativo desempeña un papel vital en la patogénesis de la enfermedad del cáncer de mama, y ​​se produce como resultado de cambiar el equilibrio hacia la palabra prooxidantes en lugar de antioxidantes8. Este estudio mostró un enorme aumento en los niveles de MDA en ratones no tratados con cáncer de mama, lo que concordaba con los resultados de estudios anteriores45,46. Además, los resultados del nivel tumoral de SOD y GSH en ratones portadores de cáncer de mama no tratados revelaron una disminución muy significativa en comparación con la grasa mamaria de ratones normales.

De acuerdo con trabajos anteriores, la cimetidina mejoró el estrés oxidativo causado por la irradiación acumulativa en dosis bajas al elevar la actividad de las enzimas SOD y GSH y abordar los niveles de MDA47. El efecto antioxidante de la vitamina C también ha sido reportado en muchas investigaciones48,49.

Curiosamente, la combinación provocó la detención más significativa de los niveles elevados de MDA y elevó los niveles de SOD y GSH en los tejidos del cáncer de mama, lo que ilustra su papel beneficioso en la reversión del estado de estrés oxidativo.

Se evaluó la vía PI3K/AKT/mTOR para revelar los mecanismos de señalización mediante los cuales los mediadores TAMC apoyan el crecimiento y la supervivencia del tumor. Se sugirió que los niveles elevados de histamina podrían activar H2R, lo que llevaría a un aumento en el nivel de AMPc, que posteriormente se acompaña de la activación de PKA7. Esta sugerencia estaba en línea con nuestros resultados, que muestran una elevación tanto en los niveles tumorales de histamina como en la expresión de ARNm de PKA en ratones portadores de tumores no tratados. Como bloqueador H2R, la cimetidina abordó la activación de AMPc-PKA, como lo confirma la reducción de los niveles de expresión de PKA en los ratones tratados con cimetidina. La vitamina C también fue capaz de reducir la activación de PKA, lo que se sugirió para disminuir el nivel de histamina y posteriormente reducir la activación de H2R. La reducción más evidente en la actividad de PKA se observó en el grupo tratado con la combinación.

La PKA puede interactuar con el IRS-1 aguas abajo para activar la vía PI3K/AKT/mTOR relacionada con la supervivencia, la proliferación y el crecimiento de las células cancerosas11. Nuestros resultados indicaron que la PKA activada en ratones con tumores no tratados podría activar el IRS-1, como lo demuestra el aumento de los niveles de expresión de ARNm de IRS-1. Además, se mostró un aumento significativo en la expresión de las moléculas PI3K, AKT en el grupo de ratones antes mencionado, lo que sugiere que la PKA activó posteriormente el IRS-1, que era capaz de estimular la señal PI3K/AKT en los ratones portadores de cáncer de mama no tratados. La terapia combinada de cimetidina y vitamina C inhibió principalmente la activación de PKA/IRS-1/PI3K/AKT. Además, PI3K/AKT podría estar regulado positivamente por VEGFR y sus ligandos50.

Además, se ha observado que el estado de estrés oxidativo en el cáncer de mama podría activar la vía PI3K/AKT/mTOR mitigando la activación de PTEN y el regulador negativo de la vía51. Por lo tanto, podemos suponer que la terapia combinada también podría inhibir la activación de la vía PI3K/AKT/mTOR al reducir los niveles de histamina y abordar los niveles elevados de VEGF y ROS.

Además, la correlación estadística realizada para respaldar los hallazgos y la vía propuesta del estudio actual reveló que los mediadores TAMC (histamina, VEGF y TNF-α) se correlacionan positivamente con la expresión de PI3K, AKT, mTOR e IRS1, lo que indica su papel. en la proliferación y supervivencia de tumores mediante la activación de la señal PI3K/AKT/mTOR.

Se midió el volumen del tumor para evaluar el efecto inhibidor de los tratamientos administrados sobre el crecimiento del tumor de mama. En estudios anteriores, se informó que la cimetidina inhibe el crecimiento del carcinoma hepatocelular y el crecimiento de células SGC-7901 de cáncer gástrico humano trasplantables in vivo52,53. Además, la vitamina C redujo previamente el volumen tumoral en el cáncer de vejiga in vivo y mitigó el crecimiento de tumores de ovario, páncreas y glioblastoma establecidos en ratones26,54. Nuestros resultados mostraron que la capacidad del tratamiento con cimetidina para reducir el volumen del tumor de mama inducido por Ehrlich en ratones fue mayor que la observada en el grupo tratado con vitamina C. La terapia combinada provocó la disminución más significativa en el volumen del tumor. Estos resultados señalaron el efecto beneficioso de la combinación para inhibir al máximo el crecimiento del tumor de mama.

Se evaluaron los niveles de CEA, mitosis, necrosis y caspasa 3 para confirmar el efecto antitumoral de los fármacos en estudio. CEA es un marcador tumoral que se usa ampliamente en el seguimiento del cáncer de mama. En los ratones portadores de cáncer de mama no tratados, el nivel sérico de CEA estaba considerablemente elevado en comparación con los ratones de control normales, lo que concuerda con los resultados de un estudio anterior2. La cimetidina, la vitamina C y su combinación revirtieron el elevado nivel sérico de CEA, y la reducción más pronunciada se produjo en el grupo tratado con la combinación. Un estudio previo in vivo confirmó el efecto beneficioso de la vitamina C para reducir el nivel de CEA en el cáncer de colon. El mismo efecto también se observó en pacientes con cáncer de colon después de ser tratados con altas dosis de vitamina C intravenosa55,56.

Las almohadillas de grasa mamaria de ratones normales se examinaron histológica e histomorfométricamente e indicaron lóbulos y conductos mamarios normales. Mientras que el examen en el grupo de Ehrlich mostró células tumorales infiltrativas agresivas, numerosas figuras mitóticas y áreas de necrosis eran menores. Todos los tratamientos administrados aumentaron significativamente las áreas de necrosis alrededor del tumor y disminuyeron el recuento de figuras mitóticas. El efecto más significativo se observó en el grupo tratado con terapia combinada, lo que enfatiza el papel beneficioso de la terapia combinada para abordar el proceso mitótico y promover la necrosis de las células tumorales.

La caspasa 3 es el regulador crítico de la muerte celular apoptótica. Los resultados de inmunohistoquímica indicaron que el nivel de caspasa 3 en los ratones no tratados se redujo significativamente en comparación con los ratones normales, lo que promueve la supervivencia de las células tumorales, como se demostró en un estudio previo57. Todos los tratamientos administrados provocaron un incremento notable en el nivel de caspasa. La mayor elevación se observó en el grupo tratado con la combinación, lo que revela el papel beneficioso de la combinación en la promoción de la apoptosis y la reducción de la supervivencia de las células tumorales. Anteriormente se demostró que la cimetidina desencadena la apoptosis en células de cáncer gástrico in vitro, lo que corrobora nuestros hallazgos53. También se informó que la vitamina C aumenta el grado de apoptosis mediante la activación de la caspasa 3 en el carcinoma oral de células escamosas58. Se propone que la eficacia de las opciones de tratamiento actuales para inducir la apoptosis se debe a su efectividad para inhibir la producción de los mediadores TAMC y, por lo tanto, revertir sus efectos sobre la supervivencia. Las correlaciones estadísticas revelaron una correlación negativa entre los mediadores TAMC (histamina, VEGF y TNF-α) y el nivel de caspasa 3 dentro del TME. Además, la inducción de la apoptosis por vitamina C se ha demostrado a través de diferentes mecanismos, incluida la activación de las células NK, el aumento de la apoptosis inducida por FAS a través de las células T efectoras o el aumento de la permeabilidad mitocondrial, que conduce a la muerte de las células cancerosas59.

Los hallazgos anteriores en el estudio actual sugirieron el papel beneficioso de la combinación cimetidina/vitamina C como terapia inmunomoduladora antitumoral para el cáncer de mama. El estudio in vitro demuestra los efectos sinérgicos de la coadministración de los fármacos investigados.

De manera optimista, podríamos concluir que la terapia con cimetidina y vitamina C mitigó el tumor sólido de mama inducido por Ehrlich en ratones al reducir la angiogénesis, el estrés oxidativo y la inflamación. Además, fueron capaces de abordar los mediadores TAMC e inhibir la activación de la señal PI3K/AKT/mTOR. Además, el efecto sinérgico de la combinación cimetidina/vitamina C inhibió la proliferación de células tumorales y promovió la muerte de las células tumorales mediante apoptosis y necrosis, lo que disminuyó la supervivencia del tumor. Esto sugiere su uso como una de las opciones de tratamiento para el cáncer de mama (Información complementaria).

Todos los datos generados o analizados durante este estudio se incluyen en este artículo publicado.

Yousafzai, A. et al. Presentación clínica y factores de riesgo del cáncer de mama relacionados con el estilo de vida entre diferentes grupos de edad y étnicos. Indo Am. J. Farmacéutica. Ciencia. 4(11), 4464–4475 (2017).

Google Académico

Aldubayan, MA, Elgharabawy, RM, Ahmed, AS y Tousson, E. Actividad antineoplásica y papel curativo de las avenantramidas contra el crecimiento de tumores sólidos de Ehrlich en ratones. Óxido. Medicina. Célula Longev. 2019, 5162687. https://doi.org/10.1155/2019/5162687 (2019).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bahcecioglu, G., Basara, G., Ellis, BW, Ren, X. y Zorlutuna, P. Modelos de cáncer de mama: ingeniería del microambiente tumoral. Acta Biomater. 106, 1–21. https://doi.org/10.1016/j.actbio.2020.02.006 (2020).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Aponte-López, A., Fuentes-Pananá, E. M., Cortes-Muñoz, D. & Muñoz-Cruz, S. Mast cell, the neglected member of the tumor microenvironment: Role in breast cancer. J. Immunol. Res. 2018, 2584243. https://doi.org/10.1155/2018/2584243 (2018).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Oldford, SA & Marshall, JS Mastocitos como objetivos para la inmunoterapia de tumores sólidos. Mol. Inmunol. 63(1), 113–124. https://doi.org/10.1016/j.molimm.2014.02.020 (2015).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Hazem, RM y cols. Actividad anticancerígena de dos nuevos compuestos heterocíclicos mediante la modulación de VEGFR y miR-122 en ratones portadores de carcinoma de ascitis de Ehrlich. EUR. J. Farmacol. 892, 173747. https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2020.173747 (2021).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Massari, NA, Nicoud, MB y Medina, VA Receptores de histamina y farmacología del cáncer: una actualización. Hno. J. Farmacol. 177(3), 516–538. https://doi.org/10.1111/bph.14535 (2020).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Gurer-Orhan, H., Ince, E., Konyar, D., Saso, L. y Suzen, S. El papel de los moduladores del estrés oxidativo en el cáncer de mama. actual. Medicina. Química. 25(33), 4084–4101. https://doi.org/10.2174/0929867324666170711114336 (2018).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Aggarwal, V. y col. Papel de las especies reactivas de oxígeno en la progresión del cáncer: mecanismos moleculares y avances recientes. Biomoléculas 9(11), 735. https://doi.org/10.3390/biom9110735 (2019).

Artículo CAS PubMed Central Google Scholar

Nguyen, PL & Cho, J. Funciones fisiopatológicas de los receptores de histamina en la progresión del cáncer: implicaciones y perspectivas como posibles objetivos moleculares. Biomoléculas 11(8), 1232. https://doi.org/10.3390/biom11081232 (2021).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Law, NC, White, MF y Hunzicker-Dunn, ME Receptores acoplados a proteínas G (GPCR) que envían señales a través de la interacción de la proteína quinasa A (PKA) en el sustrato 1 del receptor de insulina (IRS1) para activar la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K )/vía AKT. J. Biol. Química. 291(53), 27160–27169. https://doi.org/10.1074/jbc.M116.763235 (2016).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Pilco-Ferreto, N. & Calaf, GM Influencia de la doxorrubicina sobre la apoptosis y el estrés oxidativo en líneas celulares de cáncer de mama. En t. J. Oncol. 49(2), 753–762 (2016).

Artículo CAS Google Scholar

Lefranc, F., Yeaton, P., Brotchi, J. & Kiss, R. Cimetidina, un agente antitumoral inesperado y su potencial para el tratamiento del glioblastoma (revisión). En t. J. Oncol. 28(5), 1021–1030 (2006) (PMID: 16596218).

CAS PubMed Google Académico

Kubecova, M., Kolostova, K., Pinterova, D., Kacprzak, G. y Bobek, V. Cimetidina: ¿un fármaco contra el cáncer? EUR. J. Farmacéutica. Ciencia. 42(5), 439–444. https://doi.org/10.1016/j.ejps.2011.02.004 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Sant, DW y cols. La vitamina C promueve la apoptosis en las células de cáncer de mama al aumentar la expresión de TRAIL. Ciencia. Rep. 8(1), 5306. https://doi.org/10.1038/s41598-018-23714-7 (2018).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lee, SJ y cols. Efecto de altas dosis de vitamina C combinada con un tratamiento anticancerígeno sobre las células del cáncer de mama. Res. anticancerígena. 39(2), 751–758. https://doi.org/10.21873/anticanres.13172 (2019).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Van Meerloo, J., Kaspers, GJL y Cloos, J. Ensayos de sensibilidad celular: el ensayo MTT. Métodos Mol. Biol. 731, 237–245. https://doi.org/10.1007/978-1-61779-080-5_20 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Wu, GS y cols. Actividad anticancerígena sinérgica de la combinación de dihidroartemisinina y doxorrubicina en células de cáncer de mama. Farmacéutico. Representante 65(2), 453–459. https://doi.org/10.1016/s1734-1140(13)71021-1 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Miranda-Vilela, AL et al. Los efectos protectores de la terapia antioxidante nutricional en ratones con tumores sólidos de Ehrlich dependen del tipo de terapia antioxidante elegida: evaluaciones de histología, genotoxicidad y hematología. J. Nutr. Bioquímica. 22(11), 1091–1098 (2011).

Artículo CAS Google Scholar

Zayed, DG y cols. Combinación de quimioterapia hidrofílica y fitoterapia hidrofóbica a través de nanohíbridos de QD de albúmina dirigidos a tumores: enfoques de acoplamiento covalente y complejación de fosfolípidos. J Nanobiotecnología. 17(1), 7. https://doi.org/10.1186/s12951-019-0445-7 (2019).

Artículo de Google Scholar

Khedr, NF y Khalil, RM Efecto de la hesperidina en ratones con carcinoma sólido de Ehrlich mantenidos con doxorrubicina. Biol tumoral. 36(12), 9267–9275. https://doi.org/10.1007/s13277-015-3655-0 (2015).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Fiorini, C. y col. Métodos para identificar la expresión molecular de la vía mTOR: un enfoque racional para estratificar a los pacientes afectados por carcinoma de células renales de células claras para una respuesta más probable a los inhibidores de mTOR. Soy. J. Cáncer Res. 4(6), 907–915 (2014).

PubMed PubMed Central Google Académico

Chambial, S., Dwivedi, S., Shukla, KK, John, PJ y Sharma, P. La vitamina C en la prevención y cura de enfermedades: una descripción general. Indio J. Clin. Bioquímica. 28(4), 314–328. https://doi.org/10.1007/s12291-013-0375-3 (2013).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Wang, G., Yin, T. y Wang, Y. Evaluación in vitro e in vivo de altas dosis de vitamina C contra tumores murinos. Exp. El r. Medicina. 12(5), 3058–3062. https://doi.org/10.3892/etm.2016.3707 (2016).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Verrax, J. & Calderon, PB Las concentraciones farmacológicas de ascorbato se logran mediante administración parenteral y exhiben efectos antitumorales. Radical libre. Biol. Medicina. 47(1), 32–40. https://doi.org/10.1016/j.freeradbiomed.2009.02.016 (2009).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Chen, Q. y col. Las dosis farmacológicas de ascorbato actúan como prooxidante y disminuyen el crecimiento de xenoinjertos tumorales agresivos en ratones. Proc. Nacional. Acad. Ciencia. Estados Unidos 105, 11105–11109. https://doi.org/10.1073/pnas.0804226105 (2008).

Artículo ADS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ozaslan, M., Karagoz, ID, Kilic, IH y Guldur, ME Carcinoma de ascitis de Ehrlich. África. J. Biotecnología. 10(13), 2375–2378 (2011).

Google Académico

Ribatti, D. y col. Angiogénesis y mastocitos en ganglios linfáticos centinela de cáncer de mama humano con y sin micrometástasis. Histopatología 51(6), 837–842. https://doi.org/10.1111/j.1365-2559.2007.02869.x (2007).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Reynolds, JL y cols. Histamina en el cáncer de mama humano. Hno. J. Cirugía. 85(4), 538–541. https://doi.org/10.1046/j.1365-2168.1998.00625 (1998).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Morris, DL y Adams, WJ Cimetidina y cáncer colorrectal: ¿antiguo fármaco, nuevo uso? Nat. Medicina. 1(12), 1243–1244. https://doi.org/10.1038/nm1295-1243 (1995).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Sterle, HA y cols. Papel inmunomodulador del receptor H4 de histamina en el cáncer de mama. Hno. J. Cáncer. 120(1), 128-138. https://doi.org/10.1038/s41416-018-0173-z (2019).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Martinel Lamas, DJ et al. Enfoques metodológicos para investigar los efectos de los compuestos dirigidos al receptor de histamina en modelos preclínicos de cáncer de mama. En los receptores de histamina como objetivos farmacológicos 353–387 (Springer, 2017).

Capítulo Google Scholar

Koutras, A., Kotoula, V. & Fountzilas, G. Papel pronóstico y predictivo de los polimorfismos del factor de crecimiento endotelial vascular en el cáncer de mama. Farmacogenómica 16(1), 79–94. https://doi.org/10.2217/pgs.14.148 (2015).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Chen, Z. y col. Expresión del grupo de diferenciación 34 y del factor de crecimiento endotelial vascular en el cáncer de mama y su importancia pronóstica. Oncol. Letón. 10(2), 723–729. https://doi.org/10.3892/ol.2015.3348 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Nielsen, HJ y cols. Los niveles plasmáticos elevados del factor de crecimiento endotelial vascular y del inhibidor del activador del plasminógeno-1 disminuyen durante la mejora de la psoriasis. Inflamación. Res. 51(11), 563–567 (2002).

Artículo CAS Google Scholar

Cianchi, F. y col. El papel de la ciclooxigenasa-2 en la mediación de los efectos de la histamina sobre la proliferación celular y la producción del factor de crecimiento endotelial vascular en el cáncer colorrectal. Clínico. Res. Cáncer. 11(19), 6807 (2005).

Artículo CAS Google Scholar

Ghosh, AK, Hirasawa, N. y Ohuchi, K. Mejora mediante histamina de la producción del factor de crecimiento endotelial vascular en el tejido de granulación a través de los receptores H (2). Hno. J. Farmacol. 134(7), 1419-1428. https://doi.org/10.1038/sj.bjp.0704372 (2001).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Tomita, K., Izumi, K. y Okabe, S. La inhibición de la angiogénesis inducida por roxatidina y cimetidina suprime el crecimiento de implantes de cáncer de colon en ratones singénicos. J Pharmacol Sci. 93(3), 321–330. https://doi.org/10.1254/jphs.93.321 (2003).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Kim, HN y cols. La vitamina C regula negativamente la producción de VEGF en células de melanoma murino B16F10 mediante la supresión de la activación de p42/44 MAPK. J. Bioquímica celular. 112(3), 894–901. https://doi.org/10.1002/jcb.22997 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Nakanishi, K., Hiramoto, K. & Ooi, K. Las dosis altas de vitamina C ejercen sus efectos anticancerígenos en un modelo de xenoinjerto de cáncer de colon al suprimir la angiogénesis. Biol. Farmacéutica. Toro. 44(6), 884–887. https://doi.org/10.1248/bpb.b21-00089 (2021).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Cruceriu, D., Baldasici, O., Balacescu, O. y Berindan-Neagoe, I. El doble papel del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) en el cáncer de mama: conocimientos moleculares y enfoques terapéuticos. Oncol celular. (Dordr). 43(1), 1–18. https://doi.org/10.1007/s13402-019-00489-1 (2020).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Chen, Y. et al. La vitamina C mitiga el estrés oxidativo y el factor de necrosis tumoral alfa en la neumonía grave adquirida en la comunidad y en los macrófagos inducidos por LPS. Mediadores Inflamación. 2014, 426740. https://doi.org/10.1155/2014/426740 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Yang, X. y col. El péptido de trigo protege contra el daño de la mucosa gástrica inducido por el etanol mediante la regulación negativa de TLR4 y MAPK. J. Función. Alimentos 75, 104271 (2020).

Artículo CAS Google Scholar

Laha, D., Grant, R., Mishra, P. y Nilubol, N. El papel del factor de necrosis tumoral en la manipulación de la respuesta inmunológica del microambiente tumoral. Frente. Inmunol. 27(12), 1415. https://doi.org/10.3389/fimmu.2021.656908 (2021).

Artículo CAS Google Scholar

Ellethy, AT Potencial actividad antitumoral de los fármacos antiinflamatorios no esteroides contra el carcinoma de ascitis de Ehrlich en animales de experimentación. En t. J. Ciencias de la Salud. (Qassim). 13(5), 11-17 (2019).

PubMed Central Google Académico

Ali, DA, Badr El-Din, NK y Abou-El-magd, RF Actividades antioxidantes y hepatoprotectoras de semillas y piel de uva contra el estrés oxidativo inducido por el tumor sólido de Ehrlich en ratones. Egipto. J. Aplicación básica. Ciencia. 2(2), 98–109. https://doi.org/10.1016/j.ejbas.2015.02.003 (2018).

Artículo de Google Scholar

Zhao, YN et al. Efectos protectores de la cimetidina contra el estrés oxidativo inducido por irradiación en dosis bajas. Medicina. J. Chin. Liberación Popular. Ejército 12, 128-133. https://doi.org/10.11855/j.issn.0577-7402.2017.02.07 (2017).

Artículo de Google Scholar

Mahmoudabadi, MM & Rahbar, AR Efecto de la EPA y la vitamina C sobre la superóxido dismutasa, la glutatión peroxidasa, la capacidad antioxidante total y el malondialdehído en pacientes diabéticos tipo 2. Omán Med. J. 29(1), 39–45. https://doi.org/10.5001/omj.2014.09 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Savran, M. y col. La vitamina C atenúa el estrés oxidativo inducido por metotrexato en el riñón y el hígado de ratas. Fisiol. En t. 104(2), 139–149 (2017).

Artículo CAS Google Scholar

Porta, C., Paglino, C. y Mosca, A. Dirigirse a la señalización PI3K/Akt/mTOR en el cáncer. Frente. Oncol. 4, 64. https://doi.org/10.3389/fonc.2014.00064 (2014).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Koundouros, N. & Poulogiannis, G. Señalización de fosfoinositida 3-quinasa / Akt y metabolismo redox en el cáncer. Frente. Oncol. 8, 160. https://doi.org/10.3389/fonc.2018.00160 (2018).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Borentain, P. y col. La inhibición de la expresión de selectina E en la superficie de las células endoteliales inhibe el crecimiento del carcinoma hepatocelular al prevenir la angiogénesis tumoral. Quimioterapia contra el cáncer. Farmacéutico. 77(4), 847–856. https://doi.org/10.1007/s00280-016-3006-x (2016).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Jiang, CG, Liu, FR, Yu, M., Li, JB y Xu, HM La cimetidina induce la apoptosis en células de cáncer gástrico in vitro e inhibe el crecimiento tumoral in vivo. Oncol. Representante 23(3), 693–700. https://doi.org/10.3892/or_00000686 (2010).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Peng, D. y col. La vitamina C aumenta el nivel de 5-hidroximetilcitosina e inhibe el crecimiento del cáncer de vejiga. Clínico. Epigenet. 10(1), 94. https://doi.org/10.1186/s13148-018-0527-7 (2018).

Artículo CAS Google Scholar

Abdel-Hamid, OM, Nafee, AA, Emam, MA y Elshimaa, MA El efecto de mejora de la vitamina C en el cáncer de colon inducido experimentalmente en ratas. Veterinario Benha. Medicina. J. 34(1), 329–343. https://doi.org/10.21608/bvmj.2018.54257 (2018).

Artículo de Google Scholar

Mikirova, N., Casciari, J., Rogers, A. y Taylor, P. Efecto de altas dosis de vitamina C intravenosa sobre la inflamación en pacientes con cáncer. J. Transl. Medicina. 10, 189. https://doi.org/10.1186/1479-5876-10-189 (2012).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Devarajan, E. y col. Regulación negativa de la caspasa 3 en el cáncer de mama: un posible mecanismo de quimiorresistencia. Oncogén 21(57), 8843–8851. https://doi.org/10.1038/sj.onc.1206044 (2002).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Zhou, J. y col. La vitamina C promueve la apoptosis y la detención del ciclo celular en el carcinoma oral de células escamosas. Frente. Oncol. 10, 976. https://doi.org/10.3389/fonc.2020.00976 (2020).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Pawlowska, E., Szczepanska, J. & Blasiak, J. Efectos pro y antioxidantes de la vitamina C en el cáncer en correspondencia con sus concentraciones dietéticas y farmacológicas. Óxido. Medicina. Celúla. Longev. 24, 2019. https://doi.org/10.1155/2019/7286737 (2019).

Artículo CAS Google Scholar

Descargar referencias

Financiamiento de acceso abierto proporcionado por la Autoridad de Financiamiento de Ciencia, Tecnología e Innovación (STDF) en cooperación con el Banco Egipcio de Conocimiento (EKB).

Departamento de Farmacología y Terapéutica, Facultad de Farmacia, Universidad Pharos en Alejandría, Alejandría, Egipto

Sherihan Salaheldin Abdelhamid Ibrahim

Departamento de Farmacia, Kut University College, Al Kut, Wasit, 52001, Irak

Sarah A. Abd El-Aal y Ahmed M. Reda

Departamento de Bioquímica, Facultad de Farmacia, Universidad Egipcia Rusa, Ciudad Badr, El Cairo, Egipto

Ahmed M. Reda

Departamento de Patología, Facultad de Medicina, Universidad de Alejandría, Alejandría, Egipto

Samar El Achy

Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Farmacia, Universidad Pharos en Alejandría, Alejandría, Egipto

Yasmine Shaheen

También puedes buscar este autor en PubMed Google Scholar.

También puedes buscar este autor en PubMed Google Scholar.

También puedes buscar este autor en PubMed Google Scholar.

También puedes buscar este autor en PubMed Google Scholar.

También puedes buscar este autor en PubMed Google Scholar.

YS y SI diseñaron y realizaron el experimento in vivo, analizaron las muestras recolectadas mediante técnicas de ELISA, PCR y Western blot, analizaron estadísticamente los resultados del estudio y escribieron el artículo. SA escribió y corrigió el artículo. SE realizó las evaluaciones histopatológicas, incluidas H y E, así como inmunohistoquímica para los parámetros mencionados. AR realizó la parte in vitro del experimento. Los autores declaran que todos los datos se generaron internamente y que no se utilizó ninguna fábrica de papel.

Correspondencia a Sherihan Salaheldin Abdelhamid Ibrahim.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

Springer Nature se mantiene neutral con respecto a reclamos jurisdiccionales en mapas publicados y afiliaciones institucionales.

Acceso Abierto Este artículo está bajo una Licencia Internacional Creative Commons Attribution 4.0, que permite el uso, compartir, adaptación, distribución y reproducción en cualquier medio o formato, siempre y cuando se dé el crédito apropiado al autor(es) original(es) y a la fuente. proporcione un enlace a la licencia Creative Commons e indique si se realizaron cambios. Las imágenes u otro material de terceros en este artículo están incluidos en la licencia Creative Commons del artículo, a menos que se indique lo contrario en una línea de crédito al material. Si el material no está incluido en la licencia Creative Commons del artículo y su uso previsto no está permitido por la normativa legal o excede el uso permitido, deberá obtener permiso directamente del titular de los derechos de autor. Para ver una copia de esta licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/.

Reimpresiones y permisos

Ibrahim, SSA, El-Aal, SAA, Reda, AM et al. Acción antineoplásica de cimetidina/vitamina C sobre la histamina y la vía PI3K/AKT/mTOR en el cáncer de mama de Ehrlich. Informe científico 12, 11514 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-15551-6

Descargar cita

Recibido: 26 de enero de 2022

Aceptado: 24 de junio de 2022

Publicado: 07 de julio de 2022

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-15551-6

Cualquier persona con la que compartas el siguiente enlace podrá leer este contenido:

Lo sentimos, actualmente no hay un enlace para compartir disponible para este artículo.

Proporcionado por la iniciativa de intercambio de contenidos Springer Nature SharedIt

Oncología Médica (2023)

Al enviar un comentario, acepta cumplir con nuestros Términos y pautas de la comunidad. Si encuentra algo abusivo o que no cumple con nuestros términos o pautas, márquelo como inapropiado.